미생물학 No.29

 Mycobacterium spp. 는 모두 달걀이 포함된 배지에서 유리형(free) niacin을 생성한다. 하지만 대부분의 Mycobacterium spp.는 이 유리형 niacin(수용성)을 niacin ribonucleotide(비수용성)로 전환하여 축적하기 때문에 배지 내에 유리형 niacin을 축적하지 않는다. 그러나 Mycobacterium tuberculosis 및 일부 Mycobacterium bovis와 드물게 Mycobacterium simiae, Mycobacterium marinum 에서 niacin ribonucleotide로 전환하는 효소가 결여되어 대사가 차단되기 때문에 배지에 유리형 niacin이 축적된다. 축적된 유리형 niacin은 cyanogen bromide와 방향성 amine과 결합하여 노란색으로 발색된다. 

 (3) Thiophene-e-carboxylic acid hydrazide(T2H) 감수성 검사
 10마이크로 /ml T2H 가 포함된 배지에서 성장여부를 보는 검사로 Mycobacterium bovis는 발육하지 못해 감수성을 보이지만 Mycobacterium bovis를 제외한 모든 Mycobacterium spp. 는 T2H에 대하여 내성으로 이 배지에서 발육할 수 있다. 


 (4) 질산염환원 시험
 질산염환원효소를 생산하여 질산염(nitrate)을 아질산염(nitrite)으로 환원시키는가를 보는 검사로 미생물 동정에 많이 사용되는 검사이다. Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium kasasii, Mycobacterium szugai, Mycobacterium ulcerans, Mycobacterium fortuitum 등이 양성을 보인다. 


 (5) 카탈라아제 검사
 일반적으로 Mycobacterium spp. 는 카탈라아제 양성을 나타낸다. 그러나 Mycobacterium tuberculosis 중 INH(isoniazid)에 내성을 보이는 균주와 일부 Mycobacterium spp. 균주들은 카탈라아제 음성을 나타낸다. 고층배지에 생성된 집락에 3퍼센트 H2O2를 떨어뜨려 거품의 높이가 45mm 이상인 것과 미만인 것으로 구별하여 판정한다. Mycobacterium tuberculosis 는 45 밀리미터 미만의 양성으로 나타나며 광발색균(photochromogen)은 대부분 45밀리미터 이상의 양성을 보인다. 배지를 섭씨 68도로 20~30분간 처리하고 3퍼센트 H2O2 를 떨어뜨리는 내열성 카탈라아제를 실시하면 내열성 카탈라아제 생성 여부를 알 수 있다. Mycobacterium tuberculosis는 내열성 카탈라아제 음성이고 광발색균은 양성을 나타낸다. 

 (6) Pyrazinamidase 시험

 Pyrazinamidase는 Pyrazinamide를 Pyrazinoic acid와 NH3로 가수분해하는 효소이다. Pyrazinoic acid는 ferrous ammonium sulfate와 반응하여 엷은 갈색을 나타낸다. Mycobacterium tuberculosis는 4일 이내에 양성을 보이지만 Mycobacterium bovis는 7일이 지나도 음성을 보인다. 이 검사는 광발생균 내의 Mycobacterium kansasii(음성)와 Mycobacterium marinum(양성)의 구별에도 이용된다. 

 (7) Tween 80 가수분해 시험

 암발색균과 비발색균들의 구별에 이용되는 검사이다. Mycobacteria에 의해 생성되는 지질분해효소(lipase) 는 polyoxyethylene sorbitan monooleate(Tween 80)을 올레산(oleic acid)과 polyoxyethylene sorbitol로 가수분해하여 배지의 색깔을 neutral red 지시약에 의해 적색으로 변화시킨다. Mycobacterium avium은 음성, Mycobacterium kansasii는 양성, Mycobacterium gordonae는 음성을 나타낸다. 

 (8) Urease 시험
 암발색균과 비발색균들의 구별에 이용되는 검사이다. Mycobacterium avium-intracellular complex는 음성, Mycobacterium scrofulaceum은 양성 반응이다. 

 (9) Arysulfatase 시험
 대부분의 Mycobacterium spp.는 Arysulfatase를 생산한다. 이 효소는 탄산나트륨(sod.carbonate) 존재하에서 tripotassium phenolphtalein disulfate를 분해하여 phenolphtalein을 생성하면 배지의 pH가 변하여 적색을 나타낸다. 신속발육균과 지연발육균을 구별하는데 이용된다. 신속발육균은 3일이면 양성반응을 보이는 반면 지연발육균은 14일이 지나야 양성을 볼 수 있다. Mycobacterium smegmatis는 신속발육균이지만 이 시험에서 음성이다.